盤點核酸法檢測支原體的具體方法

核酸法檢測支原體的有點顯而易見：便捷、高效、準確率高、靈敏度高。核酸法分為普通PCR法和qPCR法。這兩種方法各有優缺點，也各有適應場景。

常規法PCR檢測試劑盒——Venor®GeM Classic

該試劑盒可以通過常規 PCR 對研究和工業中的細胞培養上清液、培養基和生物制藥中的支原體污染進行快速、可靠和省時的常規監測。

細胞培養物和培養基成分中的支原體（柔膜菌綱：支原體、無膽原體、螺旋體）物種都是通過高度保守的 rRNA 操縱子擴增來特異性檢測的，或者更具體地說，通過擴增支原體基因組中的 16S rRNA 編碼區來特異性檢測。在265-278 bp處檢測到支原體特異性擴增。通過使用提供的內擴增對照（在191 bp處檢測到），可以排除由于PCR抑制劑或DNA提取不當引起的假陰性結果。

優點：便捷成本低

缺點：無法定量

qPCR檢測試劑盒——Venor®GeM qEP

支原體熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規PCR基礎上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記，使PCR擴增后的產物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進行DNA擴增反應的實時監測，簡稱qPCR。

優點：靈敏度高、特異性強、時間短，2-3小時出結果，檢測結果可定量，操作簡便

缺點：

對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結果會出現假陽性。（可用培養法做補充驗證）

不同廠家生產的試劑盒質量差異巨大（由于引物及內在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專業人員推薦指導下使用。

『支原體qPCR檢測試劑盒』介紹

德國MB公司生產的支原體qPCR檢測試劑盒（均為探針法檢測），依據操作步驟的細微差別， 分『經典法』和『一步法』兩種。

此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產品，具有以下優點：

①經典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體），根據序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單，易于觀察（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽性，其他微生物或真核細胞均為陰性，無交叉反應）。