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帶您了解常規PCR Kit (一步法)

更新時間:2022-11-16  |  點擊率:923

常規PCR法介紹

常規PCR法:是根據支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設計引物,對待檢樣本DNA進行擴增,通過對擴增產物的大小分析作出診斷。

優點:①靈敏度高,特異性好。②時間短,2-3小時出結果。③符合歐洲藥典。④操作簡單。

缺點:①對于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結果會出現假陽性。(可用培養法做補充驗證)。②不同廠家生產的試劑盒質量差異巨大(由于引物及內在設計不同),需謹慎選擇,盡量在專業人員推薦指導下使用。

『支原體常規PCR檢測試劑盒』介紹

德國MB公司生產的支原體常規PCR檢測試劑盒,依據操作步驟的細微差別,分一步法和經典法兩類。此兩類試劑盒較其他廠家同類產品,具有以下的優點:

①高特異性,270bp左右的一條陽性對照條帶,涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種,操作簡單,結果易于觀察。(使用MB的試劑盒,下表列出的支原體物種均為陽性,其他微生物或真核細胞均為陰性。根據16s rRNA序列的同源性比對,該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無膽甾原體和85種支原體。)

②高靈敏度,1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。

③試劑盒含內控對照,可防止假陰性的發生。

④符合歐洲藥典要求。

適用范圍

<!--[if !supportLists]-->A. <!--[endif]-->科研用戶,細胞上清的篩查可選用MB公司生產的支原體常規PCR檢測試劑盒(一步法)。(詳見下文)

【Venor® Gem OneStep (貨號:11-8050)】或【Venor® Gem Advance (貨號: 11-7096)】

B. 對于需遵循藥典要求的生物制藥企業,可選用MB公司生產的支原體常規PCR檢測試劑盒(經典法)。

【Venor® Gem Classic(貨號: 11-1050) 】+ Taq酶 (貨號: 53-1050)】

或【Venor® Gem Classic (貨號: 11-1050G)】

特點

1. 內控對照已加在預混液中,無需另外配置,使用便捷。

2.高特異性,僅一條陽性對照條帶,即可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種。

操作簡單,易于觀察。

3.高靈敏度,1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。

4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無膽甾原體和85種支原體。

操作步驟

下列圖示以Venor® Gem OneStep支原體常規PCR檢測試劑盒(一步法)( 貨號:11-8050) 為例,具體產品操作以說明書為準。

191bp為內控對照條帶,表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時,由于內控對照與支原體DNA存在競爭,內控對照條帶變弱(例如支原體DNA>103拷貝)。

陽性對照中支原體DNA>104拷貝,內控對照條帶會完QUAN消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶,此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產生抑制,則內控對照條帶變弱(和陰性對照相比),此時應先進行DNA抽提(推薦使用:Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒),然后再檢測。

儲存條件

2~8℃至少12個月。復溶后必須在-18℃保存。

效期

1年6個月

(締一生物)

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