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支原體檢測,工業和科研有何不同?

更新時間:2022-11-04  |  點擊率:715

細胞培養中的支原體檢測,分為工業檢測實驗室檢測。


工業包括生物藥生產、CAR-T、干細胞治療、疫苗生產等,需要對主細胞庫、病毒收獲液、體外擴增的細胞等進行支原體檢查。該檢查的方法依據是藥典。

普通科研實驗室中的支原體檢測則需要保證細胞中沒有支原體污染,沒有詳細的方法規定。


那么,工業和科研檢支原體還有哪些區別呢?


檢測方法方面


工業可使用培養法、指示細胞培養法和NAT法(核酸擴增技術Nucleic acid testing)。NAT法最常見的就是PCR和熒光定量PCR。只限定了這三種。NAT在方法驗證后,可以替代前面兩種方法。適合CAR-T等的放行檢測。


科研則可采用各種方法,但一般不采用培養法,因為該方法耗時長,效率低??蒲袡z支原體常見方法有PCR法、qPCR法、酶熒光法、恒溫擴增法、DNA染色法、細胞感應法等。


用途方面


工業檢支原體用于過程控制、放行檢測。生產前和生產后的成品都需要檢。


科研檢支原體是避免支原體污染細胞,干擾實驗,一般是一周就要監測一次。


污染程度


工業上支原體污染風險主要是存在于細胞和成品中,需檢測的樣本,不一定是含血清的培養體系。在該過程中,如果發生支原體污染,通常情況下,支原體含量會比較低,因而需要方法的靈敏度高,達到10CFU/ml。


科研上支原體污染的風險,主要是存在于細胞培養過程中??蒲羞^程中,如果發生支原體污染,往往因檢測不及時而更容易被忽視。再加上培養液中含有血清,支原體繁殖較快,一旦出現癥狀時,支原體的污染程度已經處于較高的水平,因而對方法的靈敏度相對會低一些,而更看重方便程度。


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