支原體DNA抽提Kit特點(diǎn)及操作步驟

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，病原污染可以算得上是科研工作者的噩夢(mèng)了。其中支原體污染更像是一個(gè)無形的殺手，時(shí)刻威脅著細(xì)胞的安全。

細(xì)菌真菌污染還有跡可循，起碼顯微鏡下能夠清晰地看到，但是支原體個(gè)子小，不易觀察，由于繁殖速度比較慢，前期感染幾乎沒有癥狀。經(jīng)常稍不留意，就中了支原體的「陰招」。統(tǒng)計(jì)顯示，全球大約有60%左右的細(xì)胞培養(yǎng)存在或曾經(jīng)存在過支原體污染。

那到底如何判斷細(xì)胞究竟有沒有感染支原體？今天我們就來從原理上深扒一下，網(wǎng)傳的肉眼判斷是否感染支原體大法到底正不正確！

支原體感染癥狀1：細(xì)胞生長緩慢甚至死亡？

被廣泛使用的細(xì)胞培養(yǎng)基，不僅給細(xì)胞提供支持和養(yǎng)分，對(duì)于支原體而言，也是天堂一般的存在。

適宜的溫度（37℃）

合適的PH（7-8之間都可生存）

充足的養(yǎng)分（各種氨基酸、生長因子等）

一定的二氧化碳（5%左右）

與細(xì)胞培養(yǎng)高度重合的培養(yǎng)條件，注定了支原體要與細(xì)胞共同競(jìng)爭(zhēng)有限的生存資源。

早有研究表明[1]，一些支原體（包括最為常見的人型支原體、發(fā)酵支原體、精氨酸支原體等），通過精氨酸脫亞胺酶分解精氨酸來供能。當(dāng)這些支原體混入細(xì)胞培養(yǎng)體系后，會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)搶精氨酸，導(dǎo)致細(xì)胞「吃不飽飯」，出現(xiàn)營養(yǎng)不良的癥狀：生長速率異常、活力下降、易脫壁等等。

如果你培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)以下情況，基本可以確定是支原體感染了，不放心的話可以再配合支原體檢測(cè)試劑（檢測(cè)神器幫你揪出培養(yǎng)基中的支原體！）進(jìn)一步確認(rèn)。

細(xì)胞被支原體污染后的表現(xiàn)

①細(xì)胞生長緩慢

②細(xì)胞變形

③培養(yǎng)基中碎片增加

④細(xì)胞易聚團(tuán)

⑤鏡下觀察有小黑點(diǎn)

⑥培養(yǎng)基提前變色

除了影響細(xì)胞活力，支原體還會(huì)給細(xì)胞帶來的幾百種基因表達(dá)的改變,包括編碼受體、離子通道、生長因子的基因和癌基因等方面[4]。它包含高度富含免疫原性的脂蛋白，可以錨定在胞膜的外表面，被TLR2等免疫細(xì)胞的受體識(shí)別。激活NF-kB途徑，進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞活化[5]，偏離最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

支原體DNA抽提Kit特點(diǎn)及操作步驟

特點(diǎn)

1.符合歐洲藥典的要求。

2.從細(xì)胞上清和生物制品中，均可分離支原體DNA，全程只需30分鐘。

3.洗脫DNA純度高，體積50μl，保證PCR最大的靈敏。

操作步驟

試劑盒組分

Spin columns（核酸純化住）、Collection tubes（收集管）、Conditioner液、Binding Buffer E液、Buffer A1液、Buffer A2液、Buffer E液

儲(chǔ)存條件

室溫