細胞培養(yǎng)的無菌環(huán)境有哪些？

一、無菌室

無菌室的結構：一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。

無菌室的消毒和防污染：為保持無菌狀態(tài)，經常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2小時），每周甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時）和每月新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進行消毒。實際工作中，要根據(jù)無菌室建筑材料的差異來選擇合適的消毒方法。

此外，還應注意防止無菌室的污染。造成無菌室污染的可能包括：送入無菌室的風沒有被過濾除菌；進出無菌室時，能使外界空氣直接對流進無菌室的操作間；等。

二、超凈工作臺

工作原理：鼓風機驅動空氣通過高效過濾器得以凈化，凈化的空氣被徐徐吹過臺面空間而將其中的塵埃、細菌甚至病毒顆粒帶走，使工作區(qū)構成無菌環(huán)境。根據(jù)氣流在超凈工作臺的流動方向不同，可將超凈工作臺分為側流式、直流式和外流式三種類型。

超凈臺的使用與保養(yǎng)：超凈臺的平均風速保持在0.32-0.48米/秒為宜，過大、過小均不利于保持凈化度；使用前最好開啟超凈臺內紫外燈照射10－30分鐘，然后讓超凈臺預工作10－15分鐘，以除去臭氧和使用工作臺面空間呈凈化狀態(tài)；使用完畢后，要用70%酒精將臺面和臺內四周擦拭干凈，以保證超凈臺無菌。還要定期用福爾馬林熏蒸超凈臺。

這里的工作區(qū)域包括實驗臺、超凈臺、培養(yǎng)箱（水槽除外）、液氮罐、移液器、門把手等細胞培養(yǎng)的環(huán)境。

使用德國MB公司生產的支原體祛除噴霧或濕巾（品名：Mycoplasma-off™），可在5-10分鐘清除支原體，高效快速，操作方便。

產品特點及原理：

1）快速有效

噴霧劑和濕巾中含有支原體專用殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內迅速殺除支原體。

與傳統(tǒng)的化學試劑熏蒸方法相比，更加安全；與傳統(tǒng)酒精處理、紫外線照射方法相比更有效！

2）廣譜抗菌

不僅能祛除支原體，而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

3）無腐蝕性和致癌性

乙醇作為溶劑，無腐蝕性和致癌性成分。

4）操作簡便

即用型消毒液，可以快速簡單地保持工作區(qū)的清潔干凈。

使用方法及步驟：

 

噴霧劑:

注：對于細胞培養(yǎng)箱，內部噴灑支原體祛除噴霧或用濕巾擦拭后，應打開箱門通風至少1小時。如培養(yǎng)箱帶熱滅活功能，可開啟該功能以替代風干。

 

濕巾:

對于移液器，門把手，電子設備等，可使用支原體祛除濕巾。擦拭后，應讓其被消毒物體的表面保持濕潤，再讓其自然風干。

培養(yǎng)箱水槽和水浴鍋中預防支原體污染的方法

細胞培養(yǎng)環(huán)境中，培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋經常會有支原體以及各種細菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及時，水槽中的水源即會成為細胞污染的重要來源。

保持水槽的潔凈，對細胞培養(yǎng)的順利進行非常重要。

推薦眾多實驗室日常都在使用德國MB公司生產的Water Shield支原體污染防護劑（水槽用）。Water Shield可持續(xù)作用四周，使水源避免受到支原體、細菌、酵母、霉菌和孢子的污染。

 

產品特點：

1）長效。Water Shield含表面活性劑、季銨鹽和絡合劑，不易揮發(fā)，可持續(xù)作用4周。

2）安全。不含醛類或疊氮化物，對細胞無毒害。

3）廣譜。預防支原體、細菌、酵母菌、霉菌和孢子污染。

4）方便。Water Shield按1:200比例，直接加入水中，使用方便。

5）不產生水垢。

操作步驟：

1）Water Shield和蒸餾水可直接加入培養(yǎng)箱水槽或水浴鍋中。

2）Water Shield按1:200比例使用，例如：1000ml蒸餾水+5ml Water Shield，或10L蒸餾水+50ml Water Shield。

3）4周左右清洗水槽，換水，重新加入Water Shield。

 

注意事項：

避免吸入。眼睛接觸或長時間皮膚接觸可能會產生刺激性。因而，使用試劑時應戴上護目鏡和一次性手套。一旦皮膚接觸，應用大量水沖洗。

Water Shield對玻璃、陶瓷、塑料、橡膠、鋼制品、貴金屬和其他金屬安全性良好。