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大腸埃希菌O157的ISO方法解讀

更新時間:2019-06-26  |  點擊率:1588

大腸埃希菌O157作為食品致病菌,早就引起人類的注意。2001年,ISO發布了ISO 16654:2001食品和動物飼料微生物學大腸埃希菌O157檢測的水平方法,對食品和飼料中的E.coli O157檢測,給出了標準方法。

 

O157E.coli的血清型。我國標準要求在牛肉制品和生食果蔬制品中不得檢出。在ISO 16654:2001中,E.coli O157的檢測分為四步:

 

1)增菌。采用含新生霉素的改良型TSB肉湯,41.5℃孵育6h,再緊接著孵育12-18h

2)分離和富集。需要采用針對O157的抗體包被的免疫磁珠;

3)檢出:采用CT-SMAC平板和另一款原理不同的選擇性分離瓊脂

4)驗證:對CT-SMAC平板上的山梨醇陰性菌落和第二款選擇性分離瓊脂上的E.coli O157典型菌落,通過吲哚試驗和E.coli O157抗血清的凝集試驗進行驗證。

 

增菌階段,ISO推薦用Modified tryptone soya broth,即改良型TSB肉湯,對此,HIMEDIA生產有Soyabean Bile Broth Base(貨號M1286)和新生霉素添加劑(貨號FD290),配方和ISO推薦的改良型TSB肉湯*一致,可以采用。

 

對于CT-SMAC瓊脂,HIMEDIA也生產有相應培養基(貨號M1340,加添加劑,貨號為FD147),培養結果見下圖。O157為無色菌落。但不排除假陽性,如假單胞菌在此培養基中也可產生無色菌落。此時可進行氧化酶試驗,在5-10秒內觀察結果。假單胞菌為陽性,而O157為陰性。

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同時,ISO 16654:2001也指出,存在山梨醇陽性的E.coli O157不會被CT-SMAC平板檢測到。因此推薦同時使用另外一款選擇分離培養基。此時可考慮HIMEDIA的另外一款O157選擇性瓊脂(顯色培養基),貨號為MV157,品名為HiCrome™ EC O157:H7 Selective Agar Base,Modified,配合添加劑(貨號FD187)一起使用。其檢測效果見下圖。E.coli O157:H7能旺盛生長,菌落呈深紫色,而普通E.coli呈藍綠色。

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培養基添加劑中的亞碲酸鉀能抑制氣單胞菌和普羅威登菌生長,新生霉素抑制革蘭陽性菌,月桂基硫酸鈉抑制伴隨的革蘭陽性菌群。

 

在驗證階段,ISO也提示,發現存在吲哚陰性的突變菌。因此,也可以考慮用qPCR或多種生化鑒定的方式進行驗證。

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